細胞培養的成功很大程度上取決于保護細胞免受細菌、真菌和病毒等微生物的污染。非無菌物品、培養基和試劑、帶有微生物的空氣顆粒、不干凈的培養箱和污染的工作臺面均是導致微生物污染的來源。

無菌技術的作用是在環境微生物與無菌的細胞培養物之間形成一道屏障，它通過一套操作流程來降低培養物被上述污染源污染的可能。無菌技術的組成要素包括：無菌工作區 域、良好的個人衛生、無菌試劑和培養基以及無菌操作。

無菌工作區域

簡單、經濟的減少空氣顆粒和氣體揮發（例如：灰塵、芽抱、皮屑、噴嚏）污染的方 法就是采用細胞培養通風櫥。

•細胞培養通風櫥應正確設置，放置于專門用于細胞培養的區域，同時要避免來自門、 窗及其他設備的氣流，不能有直接的來往通道。

•工作臺面應保持整潔，只放置特定實驗所需的物品；不能用作儲存區域。

•使用前后均應*消毒工作臺面，周圍區域和設備應定期清潔。

•常規清潔時，工作前和工作過程中，特別是發生潑濺后，應使用70%乙醇擦拭工作 臺面。

•使用完畢后，可用紫外燈對細胞培養通風櫥內空氣和暴露在外的工作臺面進行消毒。

•在細胞培養通風櫥內不需要也不建議使用煤氣燈火焰。

•細胞培養通風櫥應始終保持運轉，長時間不使用時方可關閉。

良好的個人衛生

操作細胞培養物前后應洗手。穿戴個人防護設備不僅可保護您免受危險品污染，還可降 低皮屑以及衣服上污物和灰塵污染培養物的可能。

無菌試劑和培養基

商品化試劑和培養基經過嚴格的質量控制以確保其無菌性，但是在操作過程中這些產品 可能被污染。應遵循以下無菌操作原則以免污染。必須采用適當的滅菌方法（例如：高壓 蒸汽、無菌過濾）對實驗室中配制的所有試劑、培養基和溶液進行滅菌。

無菌操作

•必須用70%乙醇擦拭雙手和工作區域。

•在將容器、培養瓶、培養板和培養皿放入細胞培養通風櫥之前，必須用70%乙醇擦拭 其外部。

•不要從試劑瓶或培養瓶中直接傾倒培養基和試劑。

•使用無菌玻璃吸管或一次性塑料吸管和移液器操作液體；每支吸管只能使用一次，以 免交叉污染。使用時方可打開無菌吸管的包裝。吸管應始終位于工作區域內。

•試劑瓶和培養瓶用后必須蓋上，用膠帶將多孔板密封起來或者將其放入重復密封袋 中，以免微生物和空氣污染物進入，污染培養物。

•無菌培養瓶、試劑瓶、培養皿等物品使用時方可揭開蓋子，不得將其開放暴露于環境 中。操作完成后盡快蓋上蓋子。

•取下蓋子時應將蓋子開口朝下放在工作臺面上。

•必須使用無菌玻璃器皿和其他設備。

•進行無菌操作時不要說話、唱歌或者吹口哨。

•盡快完成實驗，以盡量避免污染。

無菌技術核對表

工作區域

細胞培養通風櫥設置是否正確？

細胞培養通風櫥所在區域有無氣流和直接出入通道?

工作臺面是否整潔？是否僅僅放置了實驗所需的物品？

開始工作前用70%乙醇擦拭工作臺面了嗎？

是否定期對培養箱、冰箱、冰柜及其他實驗室設備進行清潔和消毒?

個人衛生

您洗手了嗎？

您穿戴個人防護設備了嗎？

如果您留了長發，您把頭發扎在后面了嗎？

您是用移液器操作液體嗎？

試劑和培養基

您采用適當的方法對實驗室中配制的所有試劑、培養基和溶液進行滅菌了嗎？

在將容器、培養瓶、培養板和培養皿放入工作臺面之前，您用70%乙醇擦拭其外部 了嗎？

試劑瓶、培養瓶及其他容器不使用時蓋緊了嗎？

是否已將所有培養板均放入無菌重復密封袋中？

是否有試劑外觀渾濁？是否被污染了？試劑中有漂浮顆粒嗎？有難聞氣味嗎？有顏 色異常嗎？如果出現上述情況，是否已對其進行去污并丟棄？

操作

您操作時是否緩慢、謹慎、注意無菌技術了？

在將移液器、試劑瓶和培養瓶放入細胞培養通風櫥之前，用70%乙醇擦拭其表面 了嗎？

是否將蓋子口朝下放置在工作區域？

您是使用無菌玻璃吸管或者一次性無菌塑料吸管操作液體嗎？

無菌吸管是否僅僅使用一次以免交叉污染?

您是否注意到避免使吸管尖-端觸碰到任何非滅菌物品包括瓶口螺紋的外緣?

發生液體潑濺時是否立即吸干并用70%乙醇擦拭該區域？