產品及特點：

諾如病毒（Norwalk Virus）是單股正鏈 RNA 病毒，屬于人類杯狀病毒屬，是一種引起非細菌性急性腸胃炎的病毒，如諾病毒感染性強，以腸道傳播為主，通過口-糞傳播，以污染的水源、食物、貝類、物品、空氣作為主要傳播載體。諾如病毒可分為 G I-G 五個基因群，其中引起人類感染的主要是 G1 和 G2 群。因此快速靈敏診斷具有重要意義。為此本公司開發了本產品，采用RT-PCR 技術檢測疑似感染動物血清或組織中的諾如病毒 G1 型。它具有下列特點：

1.       即開即用，用戶只需要提供樣品RNA模板。

2.      提供陽性對照，便于區分假陰性樣品。

3.      產品精心優化且特異性高，引物是根據諾如病毒 G1 型RNA高度保守區設計，不會跟除此之外的其它病毒RNA發生交叉反應。

4.      RT-PCR mix 中含上樣染料，擴增反應后可以直接上樣電泳。

5.      本產品足夠50次20μL體系的PCR反應。

6.      本產品只能用于定性實驗，不能用于定量。

       7.      本產品只能用于科研。

規格及成分：

注：為避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供專一的核酸片段作為陽性對照。

運輸及保存：

低溫運輸，-20℃保存，保存期限為12個月。

自備試劑：樣品RNA

使用方法：

一、樣品DNA的制備

1.       如果有N個樣品，必須設置N+2個提取反應，多出的兩個中一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）。可以用10μL諾如病毒 G1 型PCR陽性對照（1×10E6拷貝/μL，本試劑盒提供）再加上一定量的水作為制備的陽性對照（加水后其總體積跟樣品一樣，樣品體積多少取決于所用試劑盒的要求）。可以用水作為制備的陰性對照。

2.      用自選方法純化上述N+2個樣品的DNA。本試劑盒跟市場上大多數細菌DNA提取試劑盒兼容。

二、設置PCR反應（20μL體系）

3.      標記N+4個PCR管，其中N+2個用于上步得到的DNA樣品，額外增加的兩個管一個用于PCR陽性對照，另一個用于PCR陰性對照。按照下表在各PCR管中加入下列成分：

4.      上機進行PCR，PCR反應參數為:

三、電泳分析

5.       取5-10uL擴增產物進行常規瓊脂糖電泳，檢測擴增效果，由于擴增產物較短，建議用1.5%-2.0%的瓊脂糖凝膠。

6.      陽性樣品預期得到的擴增產物長度為220bp左右。如果兩個陰性對照（樣品制備陰性對照或PCR陰性對照）有此擴增產物，說明環境污染，則整個實驗無效，不需要分析實驗結果。

7.      如果所有樣品和PCR陽性對照均無此擴增產物，則說明有系統性的問題（試劑、設備、程序、操作等），需要重復并排查原因。

       8.     如果沒有上述兩種情況，則實驗有效，可以分析樣品的擴增結果。N+2個樣品中有擴增產物的判定為陽性，無則判定為陰性。